T-2毒素測(cè)定ELISA試劑盒檢查步驟
T-2毒素測(cè)定ELISA試劑盒檢查步驟
T-2毒素主要影響血液，肝臟，腎臟，胰腺肌肉及淋巴細(xì)胞的功能，T-2毒素中毒后的一般臨床癥狀為厭食、嘔吐、腹瀉、生長(zhǎng)停滯、繁殖和神經(jīng)性能障礙等。本試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)的新一代真菌毒素檢測(cè)產(chǎn)品，操縱時(shí)間短于60min，能zui大限度地減少操縱誤差和工作強(qiáng)度。使用T2毒素試劑盒則能夠快速而正確的分析樣品中T2毒素殘留，T2毒素（T2）是由多種鐮刀菌產(chǎn)生的一種霉菌毒素。本ELISA試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被T2毒素抗原，樣本中T2毒素和此抗原競(jìng)爭(zhēng)T2毒素抗體，同時(shí)T2毒素抗體與酶標(biāo)二抗相結(jié)合，經(jīng)TMB底物顯色，樣本吸光值與其含有的T2毒素成負(fù)相關(guān)，與尺度曲線(xiàn)比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中T2毒素的含量。主要污染小麥、大麥、玉米等糧食作物及其制品，對(duì)人類(lèi)健康及畜牧業(yè)構(gòu)成了較大危害。
檢測(cè)步驟
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔板放進(jìn)原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封，保存于2～8℃。不要冷凍。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50l到對(duì)應(yīng)的微孔中，加入T2毒素酶標(biāo)物50l/孔，再加入T2毒素抗試劑50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境中反應(yīng)30min。
6、洗板：小心揭開(kāi)蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液300l/孔，充分洗滌5次，每次間隔30s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過(guò)的槍頭戳破）。
7、顯色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境反應(yīng)15～20min。
8、測(cè)定：加入終止液50l/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)，請(qǐng)?jiān)?min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測(cè)定每孔OD值。(若無(wú)酶標(biāo)儀，則不加終止液用目測(cè)法可進(jìn)行判定)。
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