細(xì)胞名稱 結(jié)直腸癌細(xì)胞；T84
形態(tài)特性: 上皮樣；多角
生長特性: 貼壁生長
特征特性: T84細(xì)胞來源于一位72歲的男性結(jié)直腸癌患者的肺部轉(zhuǎn)移灶；皮下接種至BALB/c裸鼠并連續(xù)傳代23次后建立該細(xì)胞系。在裸鼠身上傳代的過程中，該腫瘤仍保持原始的結(jié)直腸癌的組織學(xué)特性。T84細(xì)胞系生長至匯合狀態(tài)時形成單層細(xì)胞，相鄰細(xì)胞間有緊密連接和細(xì)胞橋粒；該細(xì)胞有多種肽類激素和神經(jīng)遞質(zhì)的受體，維持電解質(zhì)的定向運輸；角蛋白陽性。
培養(yǎng)條件: DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)10%FBS
傳代方法: 1:2~1:4傳代；每周2次。
傳代情況: C5
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法（-）
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產(chǎn)品名稱 | 結(jié)直腸癌細(xì)胞；T84 |
生長特性 | 貼壁生長 |
貨號 | EY-X63250 |
產(chǎn)品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞，以0.25％消化成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。
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脲,尿素Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)甲酸正戊酯
脫氫諾龍醋酸酯PN (D4.3) XP® Rabbit mAb (Sepharose® Bead Conjuga)2-氨基-甲酸
延胡索酸/富馬酸/ 反二酸Arginase-1 (D4E3M™) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)
鹽酸腎上腺素Phospho-AML1 (Ser249) Antibody8-溴異喹啉
鹽酸腎上腺素(標(biāo)準(zhǔn)品)Synaptophysin Antibody2-(溴基)吡啶
甲磺酸達(dá)氟沙星UbcH5C (D60E2) Rabbit mAb三基膦鹽
甲磺酸達(dá)氟沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-ATP-Citra Lyase (Ser455) AntibodyN-甲基對甲磺酰
鹽酸呋喃它酮Phospho-ATP-Citra Lyase (Ser455) AntibodyD-
鹽酸呋喃它酮(標(biāo)準(zhǔn)品)ATP-Citra Lyase Antibody鄰溴三氟甲氧基
海藻酸鈣AML1 Antibody甲基-[[(吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]甲酸
美芬諾酮Endoglin (D50G1) Rabbit mAb(甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)
大豆卵脂(高純)AML1 (D33G6) XP® Rabbit mAb9-蒽甲
蛋黃卵脂AML1 (D33G6) XP® Rabbit mAb1,2-二氟-代
維蘭特羅GSK-3α (D80E6) Rabbit mAb3,二氟
PD98059GSK-3α (D80E6) Rabbit mAb3,5-二氟甲
PLX4720Cyclic AMP XP® Assay Kit2,5-二氟
N,N-羰基二咪唑Rabbit IgG Isotype Control (Alexa Fluor® 488 Conjuga)活性炭
LY2835219REG4 Antibody氟-甲氧基
LEE011Rat (LTF-2) mAb IgG2b Isotype Control (PE-Cy7® Conjuga)基二化
MG132,蛋白酶體抑制劑Pbx1 Antibody1--
白鮮(標(biāo)準(zhǔn)品)Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb (Sepharose® Bead Conjuga)酰
羅替戈汀p44/42 MAPK (Erk1/2) (137F5) Rabbit mAb (HRP Conjuga)6-喹啉-8-羧酸
鹽酸羅替戈汀Phospho-STING (Ser366) (D8K6H) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)羥甲基哌啶
右雷佐生鹽酸鹽;右亞鹽酸鹽Phospho-Syk (Tyr525/526) (C87C1) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)1,二氧戊環(huán)
SGI-1776Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)甲基戊酸
JNJ-26854165 (Serdemetan)Phospho-Mnk1 (Thr197/Thr202) Antibody酸
SB505124CHD1 (D8C2) Rabbit mAb
NLG919Acetyl-Histone H3 (Lys27) AntibodyL-甘氨酰
維莫德吉(GDC0449)Acetyl-Histone H3 (Lys27) Antibody秋水仙素
Zosuquidar；LY335979Phospho-PLK1 (Thr210) Antibody (ELISA-Specific)2-氧代-基丁酸酯
ZSTK474ACE2 Antibody2-(2-氨基噻唑-基)酸酯
木犀草素-7-O-葡萄糖酸苷HSF1 Antibody2-異-基甲
STA-9090;STA9090HSF1 Antibody4,4'-二羥基二
赤芝酸DRagA (D8B5) Rabbit mAb2-氟-羥基甲酸
DAPT (GSI-IX)RagA (D8B5) Rabbit mAb2,6-二氟
赤芝酸EAPOBEC3G (D9C6Z) Rabbit mAb2-羥基芐
胞；NAMALWA形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞生長特性: 懸浮生長Rabbit S100B ELISA Kit
結(jié)直腸癌細(xì)胞；T84小鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA試劑盒apo-B100ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)ELISA試劑盒apo-B100ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠高敏*狀腺原氨(u-T3)ELISA試劑盒Apo-EELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA試劑盒Apo-EELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠丙脫氫酶E1(PDHE1)ELISA試劑盒Apo-EELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠己糖激酶(HK)ELISA試劑盒Apo-EELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠Ⅳ型膠原(ColⅣ)ELISA試劑盒Apo-HELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠糖皮質(zhì)激素受體α(GR-α)ELISA試劑盒Apo-HELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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