本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測豬血清、血漿、組織勻漿及細胞上清液中的甘油醛 - 3 - 磷酸脫氫酶（GAPDH）蛋白濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于糖酵解代謝、內(nèi)參標定及細胞生理研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 |
豬甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)elisa試劑盒 | 英文名稱 | GAPDH ELISA Kit |
貨號 | CS-0407E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實驗 |
核心原理：
?固相化?：微孔板預(yù)先包被抗豬 GAPDH 抗體。
?結(jié)合?：加入標準品或樣本，GAPDH 被固相抗體特異性捕獲。
?檢測?：加入標記的抗豬 GAPDH 抗體和 HRP 標記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復(fù)合物。
?顯色?：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍色變?yōu)辄S色。
?測定?：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
樣本要求：
1. 樣本類型與處理
?血清?：使用無熱原/內(nèi)毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。
?細胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。
?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。
2. 注意事項
樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。
細胞培養(yǎng)上清可能因細胞狀態(tài)等因素導(dǎo)致檢測波動，建議設(shè)復(fù)孔。
操作步驟：
1. 試劑準備
將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），洗滌緩沖液按1:19稀釋。?
標準品梯度稀釋：取6管標準品，按說明書稀釋至0.156-10 ng/mL。
2. 實驗流程
?加樣?：每孔加入100μL標準品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。
?加檢測抗體?：每孔加入100μL檢測抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍變黃）。?
?檢測?：450nm波長測定吸光度（OD值），15分鐘內(nèi)完成。
關(guān)鍵提示
顯色底物避光保存，混合后應(yīng)為無色。
終止液加入順序需與顯色一致，充分混勻避免綠色殘留。
使用封板膜防止蒸發(fā)，確保孵育溫度穩(wěn)定。
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